人表皮生长因子慢病毒载体的构建及表达

作者：张丽梅; 冯龙; 张艳敏; 马晶; 赵国强; 安玉会; 鲍玉洲

来源：郑州大学学报(医学版), 2010, (04): 603-606.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2010.04.002

• 人表皮生长因子
• 慢病毒载体
• 基因构建 human epidermal growth factor
• lentivirus vector
• gene construct

目的:构建人表皮生长因子(hEGF)慢病毒(LV)载体。方法:酶切并收集pcDNA3.1-hEGF载体中的hEGF目的基因片段,克隆进入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体内,将所得重组体LV-GFP-hEGF与辅助载体pΔ8.2和pVSVG共同转染人胚肾293T细胞,进行病毒包装。收集上清液,按按10-1～10-7倍比稀释后培养,检测病毒滴度;裂解细胞,进行Western Blot分析。结果:PCR扩增、HindⅢ酶切鉴定及测序结果均证实LV-GFP-hEGF构建成功。将LV-GFP-hEGF转染293T细胞,紫外光下检测可见绿色荧光;LV滴度达5×108TU/mL,转染效率>75%,...

• 单位
  郑州大学; 河南省眼科研究所