siRNA沉默AFP基因对肝癌细胞系EGHC-9901凋亡的影响

作者：张玲; 贺涛; 崔宏; 王云检; 黄长山; 黄涛; 韩风

来源：胃肠病学和肝病学杂志, 2011, 20(01): 25-28.

DOI：10.3969/j.issn.1006-5709.2011.01.007

• 甲胎蛋白
• 原发性肝癌
• 凋亡

目的建立稳定表达针对AFP基因siRNA质粒的肝癌细胞模型并探讨对其凋亡的影响。方法构建针对AFP基因的siRNAs表达质粒,脂质体法将该质粒转染肝癌细胞系EGHC-9901,G418筛选4~5周后Western blot及RT-PCR检测靶基因抑制效果,细胞分组:实验组(siRNA-afp),转染AFP-siRNA质粒组;载体对照组,转染空载体组;空白对照组,未做任何处理组。免疫荧光检测细胞在无血清状态下凋亡情况,Western blot及RT-PCR检测Caspase-3、Caspase-8等凋亡相关蛋白表达。结果在体外成功构建针对AFP的siRNA表达质粒并在体外建立稳定表达该质粒肝癌细胞系EGHC-9901,转染后细胞表达AFP近乎完全抑制;免疫荧光表明促进细胞在无血清状态下的实验组凋亡率为32%±4%,对照组凋亡率为17%±3%,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR及Western blot检测凋亡相关蛋白表明实验组Caspase-3表达较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),而Caspase-8、Caspase-9、bcl-2表达无显著差异(P>0.05)。结论在体外成功建立稳定表达针对AFP基因的siRNA肝癌细胞系,抑制AFP表达可能通过上调Caspase-3表达促进其凋亡。

• 单位
  河南省肿瘤医院