鲤疱疹病毒2型ORF144原核表达和多克隆抗体制备

作者：吴红军; 潘李佳; 李节; 何艳格; 杜宏瑶; 龚保荣; 吴宜靖; 鲍传和; 朱若林^*

来源：安徽农业大学学报, 2023, 50(03): 457-462.

DOI：10.13610/j.cnki.1672-352x.20230625.020

• 鲤疱疹病毒2型
• ORF144
• 原核表达
• 多克隆抗体

鲤疱疹病毒2型(Cyprinidherpesvirus2,CyHV-2)引起的鲫造血器官坏死病是近年来对鲫(Carassius carassius)养殖业危害最大的疾病之一。通过PCR扩增得到ORF144基因全长，将其与pET-32a原核表达载体连接构建重组载体pET-ORF144，转化到大肠杆菌中，经IPTG诱导表达得到大小约46kDa的重组蛋白，该蛋白主要以不可溶的包涵体形式存在。将重组融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体，间接ELISA检测显示抗体效价大于1∶51200。经WesternBlot验证该抗体可特异性识别感染CyHV-2的细胞中的蛋白质和纯化的融合蛋白。间接免疫荧光结果显示该蛋白定位于细胞质，呈点状分布。结果表明构建的ORF144多克隆抗体可为病毒的基因功能和致病机制研究提供基础。

• 单位
  动物科技学院; 安徽农业大学