基于SYNJ2BP~(-/-)HEK293T细胞系研究SYNJ2BP对EIAV复制的影响

作者：王欣慧; 段盈伊; 陈克伟; 王雪峰; 那雷; 杜承; 王晓钧

来源：中国预防兽医学报, 2021, 1-6.

• CRISPR/Cas9
• 马传染性贫血病毒
• SYNJ2BP
• HEK293T

为分析突触小泡磷酸酶2结合蛋白（SYNJ2BP）对马传染性贫血病毒（EIAV）复制的影响，本研究设计了2条靶向SYNJ2BP基因外显子的特异性sgRNA，将sgRNA插入plenti-CRISPRv2GFP载体获得2个重组质粒plenti-CRISPRv2GFP-SYNJ2BP-sgRNAs，将2个重组质粒转染HEK293T细胞，通过流式细胞仪分选获得单克隆细胞株，经基因测序SYNJ2BP基因产生插入突变，经Western blot确认成功敲除SYNJ2BP基因并稳定遗传。将EIAV感染性克隆质粒CMV3-8分别转染SYNJ2BP~(-/-)HEK293T细胞系与野生型细胞，经Western blot证实与野生型细胞相比敲除SYNJ2BP抑制了EIAV囊膜蛋白的表达，灰度值显示囊膜蛋白表达量降低50%。综上所述，本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了SYNJ2BP~(-/-)HEK293T细胞系，并发现SYNJ2BP基因敲除后抑制了EIAV囊膜蛋白的表达，本研究为进一步分析SYNJ2BP调节EIAV复制的分子机制提供了依据。

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所