济川煎对CaMKⅡγ沉默及过表达结肠平滑肌细胞的影响及机制研究

作者：刘聪; 张悦; 张润涛; 荆然; 郭丁丁; 倪艳; 康永^*

来源：中药药理与临床, 2023, 39(10): 2-7.

DOI：10.13412/j.cnki.zyyl.20230615.008

• 济川煎
• 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ
• 结肠平滑肌细胞
• 沉默
• 过表达
• 兰尼碱受体

目的:观察济川煎对钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(Calmodulin-dependent protein kinases Ⅱγ,CaMKⅡγ)沉默及过表达大鼠结肠平滑肌细胞的影响及机制。方法:基于慢病毒介导构建原代大鼠结肠平滑肌细胞CaMKⅡγRNA干扰载体，建立CaMKⅡγ沉默及过表达结肠平滑肌细胞模型。将模型成功并计数的细胞悬液，随机分为空白对照组、阴性载体对照组、CaMKⅡγ沉默及过表达组、莫沙必利+CaMKⅡγ沉默及过表达1.88 mg/kg组、济川煎+CaMKⅡγ沉默及过表达4.31 g/kg组。每组细胞给药后培养24 h,采用流式细胞仪检测胞内钙离子(Ca2+)浓度变化；采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测胞内钙调蛋白(CaM)、CaMKⅡγ、L型钙离子通道Cav1.2、SR钙离子依赖性ATP酶1(SERCA1)、兰尼碱受体(RYR2)的表达情况。结果:与空白对照组比较，模型对照CaMKⅡγ沉默组CamkⅡγ mRNA表达下调，Ca2+浓度显著降低(P<0.01),CaM、CaMKⅡγ、SERCA1、RYR2蛋白表达明显下调，CaV1.2蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照CaMKⅡγ沉默组比较，Ca2+浓度降低，CaMKⅡγ蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比较，模型对照CaMKⅡγ过表达组CamkⅡγ mRNA表达上调，Ca2+浓度显著升高(P<0.01),CaM、CaMKⅡγ、SERCA1、RYR2蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),CaV1.2蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型对照CaMKⅡγ过表达组比较，济川煎4.31 g/kg组CamkⅡγ mRNA表达下调，Ca2+浓度显著降低(P<0.01),CaM、CaMKⅡγ、SERCA1、RyR2蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:济川煎可能通过抑制CaMKⅡγ的表达调控结肠平滑肌细胞功能，达到治疗阳虚便秘目的。

• 单位
  山西省中医药研究院