基于AQP9和线粒体细胞凋亡途径相关性探讨健脾活血祛湿方对体外培养H22肝癌细胞的影响

作者：李嘉; 高玲; 杨孝芳^*; 张军; 蒲翔; 施杨婉玲

来源：中国中医基础医学杂志, 2021, 27(02): 234-239.

DOI：10.19945/j.cnki.issn.1006-3250.2021.02.015

• 健脾活血祛湿方
• AQP9
• H22肝癌细胞
• 线粒体凋亡通路

目的:观察健脾活血祛湿方对体外培养H22肝癌细胞的影响,探讨健脾活血祛湿方基于通过干预水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)调控肝癌细胞线粒体凋亡途径,从而发挥抗肿瘤的作用及可能机制。方法:培养小鼠H22肝癌细胞株,取对数生长期细胞,与高、中、低不同剂量健脾活血祛湿方和环磷酰胺(CTX)共同培养,分别采用比色法(MTT)测定H22细胞增殖抑制率,Annexin V-FICT/PI法检测H22细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测H22细胞AQP9的表达,免疫印迹法(western blotting, WB)检测H22细胞AQP9、B细胞淋巴瘤-2 (b-cell lymphoma-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(bcl-2 associated x protein, Bax)表达,共聚焦显微镜观察JC-1法检测细胞线粒体膜电位变化。结果:与空白组比较,CTX组在48h、72h和96h对小鼠H22肝癌细胞的抑瘤率明显升高,凋亡率、AQP9mRNA转录水平和AQP9、Bax、Bcl-2蛋白表达水平明显增加;CTX组Merge图显示绿色荧光增多(箭头所示),提示线粒体膜电位有明显降低;与CTX组比较,健脾活血祛湿方各剂量组的抑瘤率呈时间/剂量依赖性增高,高剂量组的AQP9mRNA转录水平明显增高,中、低剂量组的AQP9mRNA转录水平下降,AQP9、BAX蛋白表达水平呈剂量依赖性增高,Bcl-2表达呈剂量依赖性下降,整体凋亡率均明显增加。结论:健脾活血祛湿方可以抑制小鼠H22肝癌细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与调控AQP9表达、激活线粒体细胞凋亡通路有关。

• 单位
  贵州中医药大学