睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996类固醇脱氢酶3α-HSD的高效表达与纯化

作者：肖琳; 薛强; 邹明强; 冯叙桥; 韦娜; 何田田; 孙芳芳

来源：中国农业大学学报, 2013, (01): 142-146.

• 睾丸酮丛毛单胞菌
• 3α-HSD
• 诱导表达
• 纯化 Comamonas testosteroni
• 3α-HSD
• inducing expression
• purification

利用分子克隆的方法扩增与克隆睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,构建以pET-15b为载体的表达工程菌,IPTG诱导蛋白表达,通过优化表达菌的最佳表达条件得到最大表达量的目的蛋白。诱导后将工程菌裂解,通过硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析,分子筛分离进行纯化,并测定纯化后蛋白的酶活性。结果表明:1)克隆获得了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因并实现了异源表达;2)工程菌的最佳表达条件为:37℃培养,0.6mmol/L IPTG诱导4h,培养基中Zn2+终浓度为0.1mmol/L;3)表达工程菌裂解后用60%硫酸铵沉淀,亲和层析和分子筛分离后得到了纯度高达99%的目的蛋白,纯化后...

• 单位
  中国检验检疫科学研究院; 沈阳农业大学