抗人抗苗勒管激素N端439～451表位单克隆抗体的制备及其性能研究

作者：陈寒雪; 孙纪奎; 杨子霄; 叶诗洋; 周永君; 别明江; 王保宁^*

来源：四川大学学报（医学版）, 2020, 51(04): 494-498.

DOI：10.12182/20200760102

• 抗苗勒管激素
• 表位单抗
• 性能

目的制备抗人抗苗勒管激素(anti-mullerian hormone,AMH)N端特定表位肽的特异单克隆抗体并对其特性进行鉴定。方法利用生物信息分析软件预测AMH特定多肽片段,合成AMH成熟N端区域的4个抗原性好的表位肽段作为筛选靶抗原。用重组AMH蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP/20细胞进行细胞融合,通过杂交瘤技术制备抗AMH单克隆抗体,用N端4个表位肽(表位1:439～451 RGRDPRGPGRAQR,表位2:273-285 PPRPSAELEESPP,表位3:42～54 DLDWPPGSPQEPL,表位4:494～506 WPQSDRNPRYGNH)分别作抗原,间接ELISA和Western blot对筛选获得的特异抗表位单抗的抗原结合特性进行鉴定。结果筛选到两株能够稳定分泌抗人AMH表位1(anti-AMH-1)和表位2(antiAMH-2)的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其分泌的单抗分别命名为anti-AMH-1和anti-AMH-2。该2株单抗细胞表达纯化后,检测其抗体效价分别为1∶12 000和1∶1 600。Western blot确认两种单抗除效价有差异外,识别抗原也有差异,anti-AMH-1不但能识别AMH的N端439-451表位肽,而且能识别重组AMH的氨基酸序列(rAMH),也能识别卵巢组织。anti-AMH-2能识别rAMH和卵巢组织。结论成功构建了抗人AMH N端的特异表位的2种单克隆抗体。

• 单位
  四川大学; 口腔疾病研究国家重点实验室; 川北医学院; 四川大学华西口腔医学院; 公共卫生学院