miR-375、miR-92b靶向NLK对非小细胞肺癌细胞生物学功能及上皮间质转化的影响

作者：王擎实; 任宏^*; 王华; 蒙锦莹; 李高峰

来源：山西医科大学学报, 2022, 53(08): 915-921.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2022.08.001

• miR-375
• miR-92b
• Nemo样激酶
• 非小细胞肺癌
• 上皮细胞-间质转化

目的 探讨miR-375、miR-92b靶向Nemo样激酶(Nemo-like kinase, NLK)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 以人NSCLC细胞A549为实验细胞，分为7组：正常对照组、miR-375阴性对照组、miR-92b阴性对照组、miR-375+miR92b阴性对照组、miR-375抑制组、miR-92b抑制组和miR-375+miR-92b抑制组。采用双荧光素酶报告法观察miR-375、miR-92b与NLK之间的靶向关系。培养72 h时采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-375、miR-92b、NLK mRNA表达，CCK-8法检测细胞增殖(OD值),划痕实验法(wound healing)检测细胞迁移，Transwell实验法检测各组细胞侵袭，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EMT标记蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达差异。结果 miR-375、miR-92b与NLK存在靶向结合位点且在A549细胞中存在靶向关系。细胞培养72 h, miR-375抑制组、miR-92b抑制组、miR-375+miR-92b抑制组与相应的阴性对照组和正常对照组比较，NLK mRNA表达、OD值、迁移距离、侵袭细胞数降低(均P<0.05)。miR-375阴性对照组、miR-92b阴性对照组、miR-375+miR-92b阴性对照组与正常对照组比较，E-cadherin、vimentin表达差异不具有统计学意义(P>0.05);与相应的阴性对照组和正常对照组比较，miR-375抑制组、miR-92b抑制组、miR-375+miR-92b抑制组E-cadherin蛋白表达均增高，vimentin蛋白表达均降低，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-375、miR-92b靶向NLK对NSCLC的生物学功能和EMT具有抑制作用，NLK表达调控可能是NSCLC的预后生物标志物和治疗靶点。

• 单位
  咸阳市第一人民医院; 昆明医科大学第三附属医院; 西安交通大学第一附属医院