pGPH1-GFP-RKIP的构建及其对白血病细胞株CCRF-CEM化疗敏感性的影响

作者：李青; 多力坤

来源：山东医药, 2014, 54(15): 20-23.

• Raf激酶抑制蛋白
• RNA干扰
• 儿童白血病
• 化疗敏感性

目的构建Raf激酶抑制蛋白(RKIP)小干扰RNA(siRNA)重组质粒pGPH1-绿色荧光蛋白(GFP)-RKIP,观察其对白血病细胞株CCRF-CEM化疗敏感性的影响。方法构建RKIP的siRNA重组质粒pGPH1-GFPRKIP,电穿孔转染至儿童白血病细胞CCRF-CEM,以Western blot法检测细胞RKIP、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)、磷酸化核因子κB抑制蛋白(p-IκB);以不同浓度9-硝基喜树碱(9NC)处理上述细胞,Western blotting法检测细胞RKIP,流式细胞仪法检测细胞caspase-3活性(计算细胞凋亡率),同上检测RKIP表达。结果成功构建pGPH1-GFP-RKIP;pGPH1-GFP-RKIP和pGPH1-GFP的转染效率分别为90.04%、91.32%;与pGPH1-GFP转染的细胞比较,pGPH1-GFP-RKIP转染的细胞RKIP表达下调,p-ERK、p-IκB表达上调(P均<0.05);9NC处理后CCRF-CEM细胞RKIP表达上调、细胞凋亡率下降(P均<0.05)。结论成功构建了RKIP的siRNA质组质粒,RKIP表达变化可能与白血病细胞化疗敏感性有关。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院