转染E1B55K基因提高Hep2细胞包装肠腺病毒Ad41的能力

作者：韩炳娟; 郭丽; 屈建国; 王敏; 王健伟; 鲁茁壮; 洪涛

来源：病毒学报, 2008, (04): 258-264.

• Ad41
• E1B55Kgene
• Hep2
• 病毒复制

人F组腺病毒Ad40、Ad41难以在体外培养的细胞中传代,被称为难养腺病毒(Fastidious adenovirus)。本研究观察了在Hep2细胞表达Ad41 E1B55K基因对Ad41复制的促进作用。从Ad41阳性粪便标本中用PCR的方法获得E1B55K基因,构建真核表达载体,转染Hep2细胞,筛选单克隆,用RT-PCR检测了E1B55K基因的表达。用引起293细胞完全CPE比较产毒量的方法对所得细胞克隆进行初步筛选,获得一株产毒相对较强的细胞Hep2-E1B#4。与对照细胞Hep2、Hep2-DNA3相比,等量Ad41接种Hep2-E1B#4产生的细胞病变效应(CPE)程度明显加深。用免疫细胞化学的方法测定产毒的感染滴度,等量Ad41接种后,Hep2-E1B#4产生的子代腺病毒滴度大于对照的9倍;半定量PCR测得Hep2-E1B#4子代病毒基因组拷贝数约为对照细胞的4倍。结果说明转染E1B55K基因促进了Ad41在Hep2细胞的复制,获得的Hep2-E1B#4细胞株可用于Ad41的分离、培养和体外扩增。

• 单位
  军事医学科学院放射与辐射医学研究所; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 中国医学科学院病原生物学研究所; 山东省医学科学院