痘苗病毒天坛株F1L区高效重组方法的建立

作者：袁航; 任皎; 赵莉; 豆亚美; 田厚文^*; 王文玲; 谭文杰

来源：病毒学报, 2022, 38(04): 791-798.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004173

• 痘苗病毒
• CRISPR/Cas9
• F1L
• 病毒载体

痘苗病毒是一种在细胞质中复制的DNA病毒，曾作为天花疫苗在消除天花的过程中起着重要作用。近年来，随着分子生物学的发展，痘苗病毒作为基因表达载体，被广泛应用于疫苗研发、肿瘤治疗等不同方面。研究者们通过自然选择或基因工程技术减毒获得了复制缺陷型痘苗病毒，除了国际上广泛使用的MVA和NYVAC以外，国内还有非复制型痘苗病毒天坛株(NTV)。由于NTV缺失了多种宿主范围基因，导致其免疫原性低下，因此仍须对其进行基因改造以获得更好的疫苗载体。目前改造方法主要是同源重组，但是传统同源重组方法的重组率很低，限制了痘苗病毒载体疫苗载体的研发。近年来随着CRISPR/Cas9技术的发展，使得建立基于CRISPR/Cas9的高效重组体系成为可能。痘苗病毒目前的研究热点主要集中在抗凋亡基因上。有实验表明，抗凋亡基因F1L的缺失在不影响痘苗病毒的复制能力的同时，还降低了毒力，改善了CD8+T细胞免疫反应水平，提高了作为疫苗载体的安全性。这些发现表明该基因的缺失是优化痘苗病毒的有效策略之一。本研究设计了痘苗病毒F1L区重组质粒，通过运用CRISPR/Cas9技术，对TTV的F1L基因进行缺失重组。经重组病毒的噬斑纯化与PCR、Western Blot验证后，证明了该重组系统的有效性与正确性。我们建立了痘苗病毒F1L区高效重组技术方法并筛选出最佳的gRNA。这为后续NTV的改造提供了更多基因靶点选择。

• 单位
  中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所