HSP65-MUC1融合蛋白中试生产工艺的优化及生物学活性检测方法的鉴定

作者：张成; 张海龙; 苏晓庆; 罗毅; 樊琦昊; 罗琪玲; 谢丽; 李元波^*; 杨莉

来源：华西医学, 2014, 29(10): 1868-1873.

• HSP65-MUC1
• 中试生产工艺
• 生物学活性
• 方法

目的优化HSP65-MUC1融合蛋白的中试生产工艺,并建立稳定的生物学活性检测方法。方法通过发酵技术获得大量表达HSP65-MUC1的大肠杆菌,高压均质机破菌获得上清液,经不同浓度的饱和硫酸铵、疏水层析、离子交换层析三步纯化后,以期获得高纯度、高质量的融合蛋白HSP65-MUC1;利用流式细胞仪检测HSP65-MUC1作用后,人外周血来源的树突状细胞(DC)表达CD86分子的能力。结果含有pET28a-HSP65-MUC1重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)能有效表达目的蛋白,10 g发酵菌体经饱和硫酸铵沉淀、phenyl sepharose FF层析柱和Q FF离子交换层析柱纯化后,可获得413.7 mg、纯度高达96%的目的蛋白;同时与阴性对照相比(10.13%±0.89%),纯化的HSP65-MUC1能显著提高DC细胞表面CD86分子的表达(29.98%±1.02%)。结论 HSP65-MUC1的中试生产工艺得到了有效的优化,同时鉴定了其生物学活性,从而为临床研究提供基础。

• 单位
  四川大学; 生物治疗国家重点实验室; 成都信立邦生物制药有限公司; 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司