1株环境源单增李斯特菌的分离鉴定及生物特性分析

作者：田常青; 张坤中; 齐玉梅; 史文静; 董志杰; 张浩浩; 何曾文; 芝吉; 赵学慧; 崇倩; 薛慧文^*; 苟惠天^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(04): 1543-1555.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.04.026

• 单增李斯特菌
• 牦牛
• 分离鉴定
• 生物特性

【目的】探究牦牛屠宰场中存在的单增李斯特菌对牦牛肉造成污染的风险。【方法】通过细菌分离培养、形态观察、生化试验及分子学方法对牦牛屠宰场50份污水样品中的单增李斯特菌进行分离鉴定；通过PCR方法对分离株血清型和毒力基因进行鉴定和检测，并测定分离株在不同生长条件下D600 nm值；通过细胞的黏附和侵袭试验及小鼠半数致死量(LD50)确定分离株的毒力。【结果】从50份污水样品中分离出1株革兰氏阳性短杆状细菌。分离株在李斯特菌显色培养基上为蓝绿色菌落，镜检为革兰氏阳性两端钝圆的短杆状菌，疑似为单增李斯特菌。生化试验结果显示，分离株可水解七叶苷，发酵葡萄糖、麦芽糖和鼠李糖，MR、VP、动力、过氧化氢酶试验为阳性，甘露醇和木糖发酵试验为阴性。系统进化树显示，分离株与单增李斯特菌EDG-e具有高度同源性，序列相似性为99%,血清型鉴定其血清型为1/2a。毒力基因检测结果显示，分离株携带inlB、inlC、inlJ、actA、plcA、prfA、mpl、hly、inlA、SigmaB毒力基因。抗应激能力试验显示，分离株在低温、强酸、强碱、高盐、乙醇胁迫和氧化等极端环境中的生长速度极显著高于标准株ATCC 19111(P<0.01)。细胞试验显示，分离株对RAW246.7细胞的黏附率为8.3%,侵袭率为2.5%,其黏附和侵袭能力均极显著高于标准株ATCC 19111(P<0.01)。对Caco-2细胞的黏附率为6.2%,侵袭率为1.5%,黏附和侵袭能力均极显著高于标准株ATCC 19111(P<0.01)。动物试验结果显示，分离株对小鼠的LD50为104.7 CFU。【结论】本研究获得的单增李斯特菌分离株血清型为1/2a,为引起人类李氏杆菌病的主要血清型，其抗应激能力较强，属于强毒株。本研究为牧区单增李斯特菌的监测提供了分子生物学基础，同时为保障牦牛肉食品安全提供理论依据。

• 单位
  甘肃农业大学