鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白的真核表达及其免疫保护效力分析

作者：周陈陈; 梁立滨; 赵青青; 黄山雨; 李奇兵; 王广文; 李俊平; 赵玉辉; 曾显营; 施建忠; 李呈军; 陈化兰; 姜丽^*

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(01): 58-62.

• H7N9
• HA蛋白
• 杆状病毒表达
• 免疫保护

为进行鸭源H7N9亚型流感病毒HA蛋白表达纯化及其免疫保护效力分析,本研究以鸭源流感病毒A/Duck/Fujian/S4170/2014 (H7N9)HA基因为模板,PCR扩增后将HA片段克隆至昆虫细胞表达载体p Fast Bac1中。将构建的重组质粒p FBacH7HA转化DH10Bac感受态细胞,提取PCR鉴定为阳性的重组杆粒Bacmid-H7HA,转染SF9昆虫细胞。结果显示重组Bacmid-H7HA表达HA蛋白,并装配成重组杆状病毒,将该病毒感染High Five细胞,大量表达H7-HA蛋白。免疫荧光试验、SDS-PAGE及western blot分析结果表明H7-HA蛋白正确表达且纯度达90%以上,血凝试验表明表达蛋白具有良好的生物活性。利用纯化的H7-HA蛋白免疫SPF鸡后进行攻毒保护试验,评价该蛋白作为免疫原对SPF鸡的免疫保护效力,结果显示HA蛋白免疫组鸡只得到100%保护。以上结果表明本研究表达纯化的H7-HA蛋白可以作为防控H7亚型禽流感的候选亚单位疫苗。

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室