La蛋白结合位点缺失的HBeAg mRNA在细胞内的稳定性

作者：林园园; 程晓明; 黎培员; 常莹; 宋宇虎; 林菊生

来源：胃肠病学和肝病学杂志, 2009, 18(10): 926-929.

• 乙型肝炎病毒
• 缺失
• La蛋白
• 稳定性

目的观察乙型肝炎病毒e抗原mRNA(HBeAg mRNA)上La蛋白结合位点的缺失对其细胞内稳定性的影响,从而进一步研究这个位点在乙肝病毒生命周期中的作用。方法针对HBeAg mRNA上La蛋白结合位点,在HBV DNA水平上利用PCR定点突变技术,构建突变型HBV载体,使其转录出来的HBeAg mRNA缺失La蛋白结合位点,将其命名为pHBV-mLa;应用脂质体将突变型HBV载体瞬时转染HepG2细胞,同时将转染了野生型HBV载体的细胞作为对照组;在各组中,用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测HBeAg mRNA,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中HBeAg。结果酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的突变型HBV载体—pHBV-mLa。转染后半定量RT-PCR检测发现,突变后HBeAg mRNA水平明显低于未突变的对照组,ELISA检测发现突变组中HBeAg表达下调。结论HBV-DNA上引入的突变可以破坏HBeAg mR-NA上La蛋白结合位点,影响HBeAg mRNA在细胞内的稳定性。HBeAg mRNA上La蛋白结合位点对乙肝病毒生命周期至关重要。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院