氨基酮戊酸光动力疗法对鳞状细胞癌细胞株A431蛋白激酶D1及其磷酸化位点的影响

作者：顾静; 王付亮; 王来群; 刘保国^*; 周萌; 苗国英; 李小静

来源：中华皮肤科杂志, 2018, 51(02): 96-100.

• 光化学疗法
• 氨基酮戊酸
• 肿瘤, 鳞状细胞
• 蛋白激酶类
• 原代细胞培养
• A431细胞

目的研究氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对皮肤鳞状细胞癌A431细胞蛋白激酶D1(PKD1)的影响, 探讨ALA-PDT诱导A431细胞凋亡的机制。方法体外培养A431细胞, 用CCK-8法检测筛选出抑制作用最强的ALA浓度和光动力照射(PDT)剂量组合。将对数期生长A431细胞随机分为不予任何干预的对照组、ALA组、PDT组及ALA-PDT组, 观察4组细胞接受相应干预12、24、36、48 h后细胞增殖抑制率和增殖抑制作用最强时间点的凋亡率。反转录PCR检测ALA-PDT作用A431细胞不同时间点后各组PKD1基因mRNA的表达。Western印迹法检测各组A431细胞中PKD1及其磷酸化位点Tyr463蛋白(pTyr463)、Ser916蛋白(pSer916)表达。结果 ALA浓度1.5 mmol/L、光照剂量2 J/cm2为最佳剂量组合。4组细胞干预12、24、36、48 h的增殖抑制率差异有统计学意义(F= 39.56, P < 0.05)。孵育24 h时:ALA-PDT组细胞增殖抑制率(46.26% ± 1.25%)高于ALA组(14.65% ± 0.33%)、PDT组(14.96% ± 0.68%)和对照组(11.98% ± 0.32%), 差异有统计学意义(均P < 0.05);ALA-PDT组细胞增殖抑制率高于12 h(P < 0.05);4组细胞凋亡率差异有统计学意义(F= 16.32, P < 0.05), ALA-PDT组(41.92% ± 3.23%)高于对照组(4.67% ± 0.88%)、ALA组(7.02% ± 1.52%)和PDT组(8.37% ± 0.59%), 均P < 0.05。ALA-PDT作用于A431细胞后0、6、12、24、36、48 h, 细胞PKD1基因mRNA的相对表达量差异有统计学意义(F= 22.24, P < 0.05), 孵育24 h mRNA相对表达量低于0、6、12 h(均P < 0.05), 与36、48 h差异无统计学意义(均P > 0.05)。4组A431细胞中pSer916表达量差异无统计学意义(F= 1.53, P > 0.05), PKD1和pTyr463表达量差异有统计学意义(F值为10.04、8.27, 均P < 0.05), ALA-PDT组PKD1、pTyr463的表达低于对照组、ALA组、PDT组(均P < 0.05)。结论 PKD1可能参与ALA-PDT疗法诱导A431细胞凋亡的光化学反应进程, 且可能是通过Tyr463位点活化促进癌变的发展。

• 单位
  河北工程大学附属医院; 河南宏力医院; 河北医科大学