维氏气单胞菌Cbl蛋白的原核表达及纯化

作者：张伊动; 马香; 李宏; 唐鸿倩; 刘柱; 唐燕琼^*

来源：热带生物学报, 2021, 12(03): 333-339.

DOI：10.15886/j.cnki.rdswxb.2021.03.009

• Cbl
• 载体构建
• 原核表达
• 蛋白纯化

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)引起的细菌性疾病已威胁到鱼类养殖业的发展。Cbl(类CysB蛋白)是细菌硫代谢的重要调控因子之一。本研究选取pET-28a为Cbl的原核表达载体,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,使用IPTG(Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达,用SDSPAGE凝胶电泳验证蛋白条带,再用BOSTER的BCA蛋白浓度测定试剂盒测量Cbl蛋白浓度,寻找较适宜的蛋白表达条件。结果表明,当诱导时间为8 h,IPTG终浓度为0.1 mmol·L-1,诱导温度为15℃,咪唑洗脱浓度为100 mmol·L-1时,Cbl蛋白质量浓度能达到601.405 mg·L-1,可满足后续实验要求。

• 单位
  海南大学