人滋养层干细胞的分离培养与鉴定

作者：陈娟; 马征来; 卢永收; 潘文霞; 武传叶; 孙美英; 李超^*

来源：精准医学杂志, 2022, 37(06): 539-544.

DOI：10.13362/j.jpmed.202206017

• 滋养层
• 胎儿干细胞
• 细胞培养技术
• 细胞分离
• 生物标记
• 核型分析
• 细胞分化

目的 建立可在体外培养的人滋养层干细胞系(hTSCs),为研究胎盘的发育机制提供新的模型。方法 取临沂市妇幼保健院生殖医学科患者捐赠的发育正常的5～6 d囊胚，利用延时培养技术分离获取hTSCs,进行细胞核型分析，利用免疫荧光技术和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测hTSCs标记物的表达，并对hTSCs的侵袭能力、分化能力以及内分泌功能进行检测。结果 本实验成功建立4株hTSCs,其均具有正常细胞核型。免疫荧光技术检测显示，第8代hTSCs中转录因子活化蛋白2C(TFAP2C)、细胞角蛋白7(CK7)、转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)稳定表达；RT-qPCR检测结果显示，第8、16代hTSCs中CK7、GATA3、TFAP2C、TEAD4基因的相对表达量无显著性差异(P>0.05);分化组第2、4、6天穿过trasnswell微孔的细胞数量均多于未分化组(F=53.31～234.55,P<0.05);第4、6天分化组穿过trasnswell微孔的细胞表达GCM1的比例均高于未分化组(F=50.25,131.13,P<0.05);分化组中CK7、SDC-1、β-hCG和ITGA5基因的相对表达量均显著高于未分化组(t=-6.78～-2.51,P<0.05);分化组第2、4、6天培养基中雌二醇、孕酮浓度均高于未分化组(F=25.06～225.62,P<0.05)。结论 本研究成功分离获取的hTSCs具有正常核型，均表达hTSCs特异标记物，其侵袭能力、分化能力及分泌功能等与人类早期胎盘滋养层细胞相似。这将为进一步研究人类滋养层细胞的发育和功能提供有力的工具。

• 单位
  临沂市妇幼保健院; 青岛大学附属医院