摘要
为了实现犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)核衣壳蛋白(N蛋白)在原核表达系统中的高效表达,试验参考GenBank中发布的CDV N基因序列(登录号为DQ522030.1),在不改变N蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-CDV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达,经IPTG诱导表达后利用His-tag镍柱进行纯化,对纯化后的CDV N重组蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定、浓度测定、Western-blot鉴定,并用犬瘟热抗原快速检测卡检测该重组蛋白的免疫反应性。结果表明:经PCR扩增成功合成大小约为1 581 bp的CDV N基因;重组质粒pET28a-CDV N经过NdeⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定,在1 581 bp处出现条带,与预期结果相符;在诱导温度为30℃、IPTG诱导终浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为8 h时,CDV N重组蛋白的表达量最高。经His-tag镍柱纯化,得到的CDV N重组蛋白纯度较高,浓度达1.783 0 mg/mL,在60 ku处可见明显的蛋白印迹,犬瘟热抗原快速检测卡可检测出清晰的条带。说明CDV N重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达,且免疫反应性良好。
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单位生物工程学院; 重庆理工大学