犬瘟热病毒核衣壳蛋白的原核表达与鉴定研究

作者：冉皑; 凌洪权; 骆璐; 吴胜昔^*; 曾政^*; 谷志鹏; 龚吕鸿; 李云; 陈娅; 郭宇

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (11): 84-140.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.08.0284

• 犬瘟热病毒
• N蛋白
• 原核表达
• 镍柱纯化
• 蛋白免疫印迹

为了实现犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)核衣壳蛋白(N蛋白)在原核表达系统中的高效表达，试验参考GenBank中发布的CDV N基因序列(登录号为DQ522030.1),在不改变N蛋白氨基酸序列的情况下，对该基因的密码子进行优化，化学合成N基因，并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中，构建重组质粒pET28a-CDV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行表达，经IPTG诱导表达后利用His-tag镍柱进行纯化，对纯化后的CDV N重组蛋白进行SDS-PAGE电泳鉴定、浓度测定、Western-blot鉴定，并用犬瘟热抗原快速检测卡检测该重组蛋白的免疫反应性。结果表明：经PCR扩增成功合成大小约为1 581 bp的CDV N基因；重组质粒pET28a-CDV N经过NdeⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定，在1 581 bp处出现条带，与预期结果相符；在诱导温度为30℃、IPTG诱导终浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为8 h时，CDV N重组蛋白的表达量最高。经His-tag镍柱纯化，得到的CDV N重组蛋白纯度较高，浓度达1.783 0 mg/mL,在60 ku处可见明显的蛋白印迹，犬瘟热抗原快速检测卡可检测出清晰的条带。说明CDV N重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达，且免疫反应性良好。

• 单位
  生物工程学院; 重庆理工大学