实时定量聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3方法的建立

作者：曹达龙; 姚旭东; 张世林; 戴波; 张海梁; 沈益君; 朱耀; 朱一平; 施国海; 马春光; 肖文军; 秦晓健; 林国文; 叶定伟

来源：上海医学, 2011, 34(07): 521-524+482.

• 前列腺癌
• 前列腺癌抗原3
• SYBR Green
• 实时荧光定量聚合酶链反应

目的建立检测前列腺癌抗原3(PCA3)基因的实时定量聚合酶链反应(PCR)方法。方法应用反转录-PCR扩增PCA3后,通过琼脂糖凝胶电泳和基因测序进行鉴定。应用SYBR Green实时荧光定量PCR检测PCA3和建立相应的标准曲线,使用熔解曲线分析扩增产物的特异性。同时在临床标本中验证所建立的PCA3检测方法的效能。结果琼脂糖凝胶电泳和基因测序均提示扩增产物是特异性的。建立的检测PCA3的SYBR Green实时荧光定量PCR方法的线性检测范围为1×101~1×10-7拷贝,扩增效率为98%,决定系数为0.999。熔解曲线仅见单一的峰,证实扩增产物是特异性的。该方法的日内和日间变异系数分别为2.1%和2.7%。利用所建立的PCA3检测方法分析86例前列腺癌患者和45例非前列腺癌患者尿液中的PCA3表达水平,结果表明PCA3早期诊断前列腺癌的性能显著优于血清前列腺特异性抗原(PSA)。结论建立了一种快速、灵敏、高特异性、宽定量范围和高重复性检测PCA3的实时定量PCR方法。

• 单位
  复旦大学附属肿瘤医院