Klhl24基因起始密码子突变小鼠毛囊异常生理表型分析

作者：赵倩; 宋忠亚; 杨勇^*

来源：中华皮肤科杂志, 2020, 53(12).

• 毛囊
• 小鼠, 突变型
• 秃发
• 线粒体
• 细胞凋亡
• Klhl24基因

目的探究Klhl24基因起始密码子突变小鼠毛囊异常的生理表型, 为阐明Klhl24调控毛囊发育的机制提供基础。方法将通过CRISPER/Cas9技术构建的Klhl24基因起始密码子突变Klhl24c.3G>T杂合(Klhl24c.3G/T)雄性小鼠与野生型雌性小鼠杂交, 对同窝小鼠进行基因型鉴定, Klhl24c.3G/T雄性小鼠和野生型(WT)雄性小鼠分别作为实验组与对照组, 每组小鼠≥ 3只。在小鼠出生后第21天(第1个毛发静止期)及45天(第2个毛发静止期)进行胶带贴毛实验, 对小鼠背部皮肤组织进行Ki67免疫组化检测, 并用扫描电镜、透射电镜观察, 用脱氧核糖核苷酸介导的dUTP末端标记(TUNEL)试剂盒检测毛囊内凋亡细胞。实验组与对照组检测结果比较采用Dunnett-t检验。结果第1个静止期与第2个静止期Klhl24c.3G/T小鼠每0.25 cm2胶带脱落毛干数量分别为1 224 ± 51.08与1 514 ± 72.15, WT小鼠分别为320 ± 55.68和125 ± 2.86, 第1、2个静止期Klhl24c.3G/T小鼠脱落毛干数量均明显多于WT小鼠(t = 11.96、19.24, 均P < 0.001)。对第1个静止期脱落毛干进行扫描电镜观测, 显示脱落毛干底部呈杵状。出生后第59天时, WT小鼠背部无新毛干长出, 毛囊处于静止期, 而Klhl24c.3G/T小鼠背部已有新毛干长出, 毛囊进入下一个生长期。透射电镜观察显示, 在第1个毛囊静止期(P21)Klhl24c.3G/T小鼠背部皮肤毛囊细胞中线粒体内嵴结构混乱, 单个毛囊结构中凋亡细胞数量为12 ± 1.15, 高于WT小鼠(3 ± 0.63, n = 8, t = 6.874, P < 0.001)。结论 Klhl24c.3G/T小鼠毛发异常表型主要为毛囊静止期锚定毛干能力降低, 毛囊生长期提前, 毛囊细胞中线粒体结构异常, 并且凋亡细胞数量增加。

• 单位
  北京大学第一医院; 北京协和医学院; 中国医学科学院