猪链球菌组氨酸三联体蛋白多抗的制备及Dot-ELISA检测方法的建立

作者：蔡旭燊; 燕书豪; 赵芷若; 郑峰; 胡丹; 卢亚维; 申雪娇; 何铠; 熊晓辉; 操敏^*; 卢一辰^*

来源：中国人兽共患病学报, 2022, 38(08): 657-665.

• 猪链球菌
• HtpsC蛋白
• Dot-ELISA

目的 建立一种猪链球菌的快速、简便检测方法。方法 根据猪链球菌2型强毒株05ZYH33组氨酸三联体蛋白HtpsC蛋白基因序列设计特异性引物，将HtpsC蛋白基因克隆至原核表达载体pET-30a并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经0.2 mmol/L IPTG、15℃条件下诱导表达HtpsC蛋白。经Ni-IDA纯化后免疫新西兰白兔获得抗血清，通过亲和层析纯化制备Anti-HtpsC多克隆抗体。在此基础上，建立检测猪链球菌的斑点酶联免疫吸附检验法(Dot-ELISA),进一步优化了检测条件，并对该方法的特异性和敏感性进行评价。结果 通过原核表达成功制备了HtpsC蛋白。Western blot结果显示，制备的Anti-HtpsC多克隆抗体可特异性结合HtpsC蛋白。优化的最佳多抗使用浓度为2.5μg/mL,最佳酶标二抗稀释倍数为1∶3 000。特异性试验结果表明，含HtpsC蛋白基因的多种血清型猪链球菌均可呈现清晰的黄褐色斑点，但不含该蛋白基因的9型猪链球菌除外。而其他对照菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、化脓性链球菌、无乳链球菌和粪肠球菌均无斑点出现。灵敏度试验结果表明，该方法的检测限为1×106 CFU/mL。结论 本研究建立的Dot-ELISA方法特异性强，灵敏度良好，可用于检测多种血清型猪链球菌。

• 单位
  南京工业大学