犬干扰素α4在CHO细胞中的稳定表达

作者：王晶宇; 欧阳伟; 王永山; 夏兴霞; 诸玉梅; 王晓丽; 潘群兴; 孟凯; 毕振威; 安欣; 楼晶瑶; 姚火春

来源：中国兽医科学, 2017, 47(04): 448-454.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2017.04.007

• 犬干扰素α4(CaIFN-α4)
• CHO细胞
• 真核表达
• 慢病毒
• 绿色荧光蛋白

为制备高活性的犬干扰素α4(CaIFN-α4),将犬IFN-α4和绿色荧光蛋白(GFP)基因用2个GGGGS五肽柔性肽连接,获得犬IFN-α4和GFP的融合基因(CaIFN-α4-GFP)。将该融合基因与真核表达载体pLeGFP连接,构建重组表达质粒pL-CaIFN-α4-GFP,并与其他3种慢病毒质粒(pC-Gp,pR-Rev和pC-VsvG)共同转染293FT细胞,包装获得重组慢病毒(vCaIFN-α4-GFP)。用获得的重组慢病毒感染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,经杀稻瘟菌素筛选、流式细胞仪分选和有限稀释法克隆转染细胞,获得表达CaIFN-α4-GFP的CHO细胞。用荧光显微镜观察构建的CHO细胞呈现绿色荧光,用MDCK与MDB K细胞检测CHO细胞培养上清液具有抗水疱性口炎病毒活性,活性分别为1.39×105和2.19×104U/m L。本研究成功地利用CHO细胞表达了具有活性的犬干扰素α4,为进一步研制高活性的犬IFN-α4生产系统奠定了试验基础。

• 单位
  江苏省农业科学院; 农业部