广州管圆线虫GAMMA-BBH基因的克隆表达鉴定和荧光定量检测

作者：孟锦绣; 何蔼; 程梅; 甘明; 徐贵峰; 李卓雅; 余细勇; 蒋文玲; 李运雄; 詹希美

来源：热带医学杂志, 2007, (07): 613-617.

• 广州管圆线虫
• γ-丁基甜菜碱羟化酶
• 克隆
• 表达

目的亚克隆和表达广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶(γ-butyrobetaine hydroxylase,GAMMA-BBH)基因,对该蛋白属性进行鉴定,定量检测不同虫龄该目的基因表达量。方法PCR扩增GAMMA-BBH cDNA基因,产物经NcoⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切后连接至原核表达载体重组为pET-BBH,在BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和酶活性测定鉴定表达产物,用荧光定量PCR方法检测广州管圆线虫不同虫龄GAMMA-BBH的表达量。结果PCR和核苷酸序列测定结果表明pET-BBH构建正确并能在IPTG诱导下表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表明表达产物分子量与预期分子量(Mr=48500)一致,酶学测定显示表达产物有GAMMA-BBH的酶活性,荧光定量PCR方法检测结果显示GAMMA-BBH在虫体不同虫龄期表达量不一致。结论目的基因能正确编码并表达具有酶活性的GAMMA-BBH,该酶的表达量与虫龄和寄生部位可能有关。

• 单位
  基础医学院; 中山大学; 广东省人民医院