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摘要
为克隆PtPME6基因，构建不同原核表达载体，获得最佳原核可溶性表达方法，分析预测蛋白结构和底物活性。本研究从毛果杨cDNA中扩增PtPME6基因，以IPTG诱导可溶性重组蛋白质的表达量为指标筛选最佳载体，在线软件进行生信分析。结果表明，PtPME6基因编码270个氨基酸组成的亲水蛋白，分子量为30.32 kD，无信号肽和跨膜区。PtPME6成功构建至5个原核表达载体上，通过IPTG诱导后pMAL-c5e载体表达的可溶性蛋白质量最高。分子对接结果表明多糖底物HGA-unit与PtPME6形成的复合物结合能最低为-4.12 kcal/mol，抑制剂PE与PtPME6形成7种相互作用，其复合物构象最为稳定。pMAL-c5e载体可高效诱导PtPME6可溶性重组蛋白表达。PtPME6蛋白对不同底物以及不同抑制剂的结合能力具有差异。本研究结果可为毛果杨PME的体外酶学性质等提供理论基础。
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单位中国林业科学研究院; 成都大学; 林木遗传育种国家重点实验室
