BRAF野生型及BRAFV600E突变型的黑色素瘤细胞中Mps1基因对BRAFWT/MEK/ERK通路的影响

作者：张玲; 贺婵婷; 毕炀辉; 刘峰; 崔鹤洋; 王娟; 宋彬; 师如意; 杨斌; 王芳; 贾志武; 赵振祥; 刘静

来源：中华病理学杂志, 2015, 44(04): 274-277.

• 黑色素瘤
• 转染
• 印迹法, 蛋白质

目的研究野生型BRAF及突变型BRAFV600E背景下Mps1激酶对BRAFWT/MEK/ERK通路的影响。方法 (1)在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中单独或联合转染pBabe–puro–GST–BRAF–WT/pBabe–puro–GST–BRAFV600E、pBabe–puro–GFP–Mps1–WT及空载体, 应用Western blot方法来检测Mps1及p–ERK表达水平。(2)用pSUPER–Mps1反转录病毒感染BRAF野生型及BRAFV600E突变型背景黑色素瘤细胞, 敲低内源性Mps1, Western blot法检测Mps1及p–ERK表达水平。(3)在BRAFV600E突变型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe–puro–GFP–Mps1, Western blot法检测Mps1及p–ERK表达水平。结果 (1)在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe–puro–GST–BRAF–WT及pBabe–puro–GFP–Mps1–WT, 与未处理组及转染空载体组相比, p–ERK水平显著降低(P<0.01);在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe–puro–GST–BRAFV600E及pBabe–puro–GFP–Mps1–WT, 与未处理组及转染空载体组相比, p–ERK表达水平未发生明显变化。(2)在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中敲低内源性Mps1后, 与对照组相比p–ERK含量增多;而在BRAFV600E突变型黑色素瘤细胞中敲低内源性Mps1后, 与对照组相比p–ERK含量未发生明显变化。(3)转染Mps1的BRAFV600E突变型细胞中p–ERK水平较对照组及空载体组没有发生显著变化。结论 Mps1激酶和BRAFWT/MEK/ERK通路之间存在一条自动调节的负反馈回路, 而癌基因BRAFV600E表现出对该负反馈回路的抵抗作用。

• 单位
  山西医科大学; 山西医科大学第一医院; 基础医学院