花鲈C型凝集素受体CD302基因的分子鉴定及其在哈维氏弧菌感染下的表达

作者：张艺榕; 李长红^*; 陈炯

来源：农业生物技术学报, 2021, 29(03): 424-434.

• 花鲈
• 分化簇抗原302 (CD302)
• 哈维氏弧菌
• 基因表达
• Western blot

分化簇抗原302 (cluster of differentiation 302, CD302),又称DEC-205相关的C型凝集素-1(DEC-205-associated C-type lectin-1, DCL-1),是一种Ⅰ型跨膜C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CLR),参与细胞粘附、迁移、胞吞和吞噬等过程,在抵抗病原感染的过程中发挥着重要作用。本研究从花鲈(Lateolabrax japonicus)组织转录组中获得LjCD302 cDNA序列(GenBank No. MT468568)。LjCD302cDNA全长2 280个核苷酸,开放阅读框包含729个核苷酸,编码由242个氨基酸(anomic acid, aa)组成、分子量为26.9 kD以及等电点为4.97的多肽。LjCD302分子内包含1个信号肽序列(aa 1～27)、1个C型凝集素样结构域(C-type lectin-like domain, CTLD)(aa 30～165)、1个跨膜结构域(aa 179～201)和1个胞质尾区(aa 202～242)。氨基酸序列同源性分析显示,LjCD302与尖吻鲈(Lates calcarifer) CD302同源性最高,为82.0%。系统进化树分析表明,鱼类、两栖类、爬行类及哺乳动物CD302单独成簇,LjCD302位于鱼类这一大簇中,与尖吻鲈进化关系最近。实时荧光定量PCR分析表明,LjCD302 mRNA主要在健康花鲈肝中表达,其次是头肾;哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后,LjCD302 mRNA在头肾、鳃、肠、脾和肝组织中的表达均显著上调(P<0.05)。原核表达了LjCD302的CTLD结构域,并制备了抗血清。Western blot分析表明,LjCD302在哈维氏弧菌感染花鲈的头肾中表达量显著增加(P<0.05)。综上,LjCD302 mRNA与蛋白的表达与哈维氏弧菌感染呈正相关,提示其可能在鱼类抗菌免疫应答中发挥重要作用。研究结果为进一步研究鱼类CLR的功能及其在抗菌免疫中的作用机制提供基础。

• 单位
  宁波大学