敲低内源性PERK基因对犬细小病毒复制的影响

作者：李艳超; 郝香琪; 周沛^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(06): 1149-1155.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.06.05

• PERK
• CRISPRi
• CPV-2

利用新型CRISPR interference(CRISPRi)技术进行蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)目的基因PERK的敲低。首先，利用慢病毒包装系统经嘌呤霉素筛选后构建稳定表达dCas9-KRAB蛋白的MDCK细胞株。然后，设计靶向PERK转录起始位点(transcription start site, TSS)的特异性小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),向该稳转细胞株转染表达sgRNA的质粒，通过qPCR检测PERK的mRNA表达水平；同时，内质网应激激活剂衣霉素(tunicamycin, Tu)处理该细胞后，通过qPCR检测PERK通路下游GRP78、GRP94、ATF4、GADD34和CHOP等基因mRNA的表达水平。最后，将犬细小病毒2型(canine parvovirus type 2,CPV-2)接种于PERK敲低的MDCK细胞株，通过绝对定量PCR测定不同时间点CPV-2的复制水平。结果表明，敲低PERK基因表达后，CPV-2的复制水平显著下降，说明PERK参与调控CPV-2的复制。以上结果为进一步探究内质网未折叠蛋白反应(endoplasmic reticulum unfolded protein response, UPRER)对CPV-2复制的影响及病毒与宿主相互作用的分子机制研究奠定了基础。

• 单位
  华南农业大学