球孢白僵菌真菌病毒BbPmV-4外壳蛋白多克隆抗体制备及应用

作者：郭文博; 路杨; 隋丽; 赵宇; 邹晓威; 张正坤^*; 李启云^*

来源：生物技术通报, 2023, 39(10): 58-67.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2023-0383

• 球孢白僵菌
• 真菌病毒
• 外壳蛋白
• 多克隆抗体
• 定位
• 免疫荧光
• 血清学检测

真菌病毒Beauveria bassiana polymycovirus 4(BbPmV-4)的感染能够提高寄主球孢白僵菌的致病力，然而其在寄主中的复制、传播和与寄主互作机理尚不清楚。本研究构建了真菌病毒BbPmV-4外壳蛋白（coat protein, CP）的原核表达载体pET-28a（+）∷BbPmV-4-CP，转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)，进行蛋白原核表达，免疫日本大耳兔制备了多克隆抗体，并利用间接ELISA,Western blot和免疫荧光等血清学方法进行病毒在寄主胞内定位和胞外复制的检测。结果表明，所表达BbPmV-4-CP为一种可溶性蛋白，相对分子质量约为28.56 kD；所制备的BbPmV-4-CP兔源多克隆抗体效价为1∶256 000;Western blot检测验证了所制备抗体能够识别对应抗原蛋白及寄主球孢白僵菌中的病毒BbPmV-4；利用所获取的多抗BbPmV-4-CP对含病毒BbPmV-4的球孢白僵菌培养上清液及沉淀中的病毒含量进行间接ELISA检测，结果显示，培养上清液中存在病毒，表明真菌病毒BbPmV-4可在寄主球孢白僵菌体内复制并游离到寄主体外；免疫荧光检测结果显示该病毒定位于真菌细胞核上。本研究制备了高效价和特异性的真菌病毒多克隆抗体，建立了球孢白僵菌真菌病毒的血清学检测技术体系，为研究真菌病毒在寄主体内的复制及其与寄主真菌的互作机理研究提供实验材料，并且可以利用病毒感染及其互作基因调控寄主毒力，创制高毒力球孢白僵菌菌株。

• 单位
  吉林省农业科学院植物保护研究所; 吉林农业科技学院; 吉林农业大学