副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定

作者：黄晓慧; 辛伟; 魏建忠; 连凯琪; 郑海学; 朱启运; 才学鹏; 李郁

来源：中国兽医科学, 2012, (10): 1053-1057.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2012.10.002

• 副猪嗜血杆菌
• 转铁结合蛋白A基因
• 原核表达
• 鉴定 Haemophilus parasuis
• transferrin-binding protein A gene
• prokaryotic expression
• identification

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blo...

• 单位
  动物科技学院; 安徽农业大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所