雌酮与雌酮硫酸钠双抗夹心检测法的建立及验证比较

作者：巩月红; 段新宇; 赵军; 姜涛; 罗俊; 高晓黎

来源：国际免疫学杂志, 2017, 40(03): 287-291.

• 雌酮
• 雌酮硫酸钠
• 酶联免疫吸附试验

目的建立雌酮和雌酮硫酸钠的双抗体夹心酶联免疫定量检测法,分别与高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)比对检测孕马尿中雌激素的含量,依据其符合性探讨雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物所得抗体的特异性。方法由已制备的雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物分别免疫动物获得相应的单克隆抗体与多克隆抗体,分别建立各自的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,鉴定其灵敏度、特异性、于现场测定样本,结果与HPLC结果比对。结果雌酮、雌酮硫酸钠衍生物小鼠单克隆抗体最佳稀释度为5μg/mL、2.5μg/mL,酶标多克隆抗体1:3 000、1:2 000,灵敏度0.515μg/mL、0.365μg/mL。两项结果雌激素含量与HPLC测定孕马尿中雌激素总含量呈曲线对应,但与单体含量不一致。结论在方法学上成功建立了两种双抗体夹心ELISA法,实际应用中没能达到实验设计要求,但由此结果推断可能为制备两种雌激素衍生物时都将结构中的特征官能团进行了改造,使得制备出的抗体不能识别特征位点而致特异性不好,需要下一步实验再确定。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 新疆医科大学