串联重复核定位信号的绿色荧光蛋白融合载体的构建与原核表达

作者：邓鹏; 陈腾祥; 龚小卫

来源：贵阳医学院学报, 2008, 33(4): 340-343.

DOI：10.3969/j.issn.1000-2707.2008.04.003

• 核定位信号
• 载体蛋白质类
• 基因表达
• 蛋白纯化

目的:构建绿色荧光蛋白一串联重复核定位信号融合蛋白的表达载体(His-EGFP-3xNLs),并在原核细胞中进行表达与纯化.方法:采用PCR方法从原先克隆在pEGFP-C1载体中的3xNLS与EGFP编码序列扩增出来,使用常规酶切和连接方法将其重组至pET-14b载体中,对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用IPTG诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白.结果:构建的His-EGFP-3xNLs融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36kD的融合蛋白.结论:成功构建了His-EGFP-3xNLS融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究NLS介导信号分子人核提供了实验材料.

• 单位
  南方医科大学