凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素条件优化的研究

作者：周年; 王安华; 洪燕; 郑洋滨; 刘宁

来源：药品评价, 2020, 17(20): 11-14.

• 破伤风抗毒素
• 纯化
• 分离
• 葡聚糖凝胶G-100

目的:探讨凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的条件。方法:使用Sephadex G-100装柱,以紫外检测蛋白质特征峰A280nm绘制的散点图为评价指标,采用单因素试验考察不同流速、洗脱剂、样品浓度对破伤风抗毒素蛋白分离的影响;经非还原型SDS-PAGE凝胶电泳后对染色结果进行扫描对比;按照《中国药典》异常毒性检查法对纯化后的组分进行安全性检查。结果:凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的最佳条件为以磷酸盐缓冲液(pH6.5)为洗脱液,样品浓度为100%,流速为0.3 mL/min;SDS-PAGE凝胶电泳结果表明在该条件下可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分F(ab’)2;异常毒性检查结果为小鼠及豚鼠均正常存活,无异常毒性。结论:优化的凝胶排阻层析条件可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分,且安全无毒,为进一步推动该类生物制品的质量提高提供参考。

• 单位
  南昌轨道交通集团有限公司; 江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心; 江西省药品检验检测研究院