铅致大鼠心肌细胞损伤中蛋白激酶C对缝隙连接蛋白43表达的调控作用

作者：王琼; 邵华; 冯斌^*

来源：中国工业医学杂志, 2021, 34(06): 497-518.

DOI：10.13631/j.cnki.zggyyx.2021.06.004

• 醋酸铅
• 心肌细胞
• 缝隙连接蛋白43(Cx43)
• 蛋白激酶C(PKC)

目的 研究醋酸铅染毒大鼠心肌细胞株(H9c2)后蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)及其磷酸化蛋白的表达变化，探讨心肌损伤过程中PKC对Cx43的调控作用。方法 (1)将对数生长期H9c2随机分组，以醋酸铅0、5、10、20μmol/L梯度浓度处理细胞12 h。(2)将对数生长期H9c2细胞随机分为对照组、醋酸铅组、醋酸铅+佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)组和PMA组。PMA预处理后的醋酸铅+PMA组、醋酸铅组细胞均给予10μmol/L醋酸铅染毒12 h, PMA组不予染毒。(3)检测各组H9c2细胞培养上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组H9c2细胞内Cx43、PKC蛋白相对表达含量及s368位点的Cx43磷酸化水平。结果 10、20μmol/L醋酸铅染毒的H9c2细胞存活率较对照组明显降低(P<0.05);10、20μmol/L醋酸铅组H9c2细胞培养液LDH活性较对照组显著升高(P<0.05);5、10、20μmol/L醋酸铅组Cx43、p-Cx43s368、PKC蛋白相对表达含量与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),且呈浓度依赖性降低；20μmol/L醋酸铅组p-Cx43/Cx43显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组H9c2细胞培养液LDH活性显著升高(P<0.05),醋酸铅+PMA组细胞培养液LDH活性显著低于醋酸铅组(P<0.05)。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组细胞内Cx43蛋白相对表达含量降低，差异均有统计学意义(P<0.05);醋酸铅+PMA组Cx43蛋白相对表达含量显著高于醋酸铅组(P<0.01)。结论 铅致心肌细胞损伤机制可能与PKC、Cx43及其磷酸化蛋白表达降低有关，PKC信号通路对Cx43表达具有调控作用。

• 单位
  山东第一医科大学; 山东省医学科学院; 山东省职业卫生与职业病防治研究院