一种基于线粒体分离纯化技术的新型线粒体DNA深度测序方法

作者：朱玉青; **; 黄明涛; **; 沈彬; 梁栋; 许争峰^*

来源：临床检验杂志, 2023, 41(03): 161-166.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2023.03.01

• 线粒体基因组
• 线粒体DNA
• 线粒体分离纯化
• 高通量测序
• 线粒体基因变异
• 非PCR

目的 开发并评估一种基于线粒体分离纯化技术的线粒体DNA(mtDNA)深度测序方法。方法 探索从细胞中分离mtDNA的最适条件；基于该方法对外周血单个核细胞(PBMC)样本进行mtDNA深度测序，通过测序片段(reads)中mtDNA reads占比评估测序文库中mtDNA的纯度，通过Sanger测序验证该方法所检出的mtDNA变异的准确性。结果 采用含低浓度NP40和不含Tween-20的裂解液裂解细胞获得的mtDNA纯度高，几乎不含细胞核基因组。在6例PBMC样本中应用该方法检测结果显示，mtDNA reads占比为87.8%～92.8%,且检测出多个mtDNA变异。对其中1个异质性变异和3个同质性变异进行Sanger测序验证，二者结果相一致。结论 本研究开发的基于线粒体分离纯化技术的mtDNA深度测序方法可应用于PBMC样本，能准确且灵敏地检出线粒体基因组的同质性和异质性变异。

• 单位
  生殖医学国家重点实验室; 南京市妇幼保健院; 南京医科大学