肉牛呼吸道感染主要细菌性病原多重PCR检测方法的建立

作者：张玉龙; 马志宇; 崔耀成; 谭天宇; 姚彩霞; 樊利虹; 左之才^*; 才冬杰^*

来源：浙江农业学报, 2020, 32(02): 210-217.

• 肉牛呼吸道
• 肺炎克雷伯菌
• 约翰逊不动杆菌
• 多杀性巴氏杆菌
• 多重PCR

为了建立一种能同时检测肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、约翰逊不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)这3种肉牛呼吸道病原菌的多重PCR检测方法,采用肺炎克雷伯菌Khe基因、约翰逊不动杆菌Ptk基因、多杀性巴氏杆菌Abhd基因设计特异性引物,经过特异性、敏感性、引物浓度、退火温度试验,建立多重PCR检测方法的反应条件和体系。结果显示,该方法能同时扩增出肺炎克雷伯菌、约翰逊不动杆菌和多杀性巴氏杆菌,3种目的菌扩增测序与GenBank上的细菌基因序列相似性均高于99%,对其他10种肉牛呼吸道病原菌扩增结果均为阴性。对3种病原基因组DNA的检测下限分别为69.8×10-5、208.9×10-4、70.8×10-3 ng·μL-1,最佳引物浓度比例为1∶1∶1,最佳的退火温度为58℃。该方法特异性强、敏感性高,为上述3种病原的快速检测、鉴定和临床牛呼吸道疾病的诊断提供了一种方便、快捷和准确的工具。

• 单位
  四川农业大学