miR-146a对食管鳞癌细胞生物学行为的影响及其机制

作者：谢文英; 杨升^*

来源：中华肿瘤杂志, 2020, 42(11).

• 食管鳞癌
• miR-146a
• Eca109细胞
• 生物学行为
• 白介素1受体相关激酶1

目的探讨miR-146a对食管鳞癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及细胞周期等生物学行为的影响及其机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-146a在食管鳞癌细胞株Eca109、KYSE140和KYSE150中的表达。将miR-146a模拟物转染Eca109细胞, 上调miR-146a的表达, 采用细胞增殖实验检测细胞的增殖能力, Transwell实验检测细胞的侵袭能力, 划痕实验检测细胞的迁移能力, 流式细胞术检测细胞的凋亡和细胞周期。运用相关生物信息学技术预测miR-146a的靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-146a与靶基因白介素1受体相关激酶1(IRAK1)3′端非翻译区(3′UTR)的结合情况, RT-qPCR技术和Western blot法分别检测靶基因mRNA和蛋白的表达。结果食管鳞癌Eca109、KYSE140和KYSE150细胞中miR-146a的相对表达量分别为0.36±0.05、0.16±0.06和0.09±0.02, 均低于食管正常上皮细胞HEEC(1.00±0.05, 均P<0.01)。miR-146a模拟物转染Eca109细胞后, 细胞的吸光度值、穿膜细胞数[(52±18)个]、划痕减少距离[48 h为(25.29±0.77)μm, 72 h为(30.66±0.91)μm]均明显低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.01), 早期凋亡率[(6.13±0.91)%]高于阴性对照组[(2.50±0.68)%, P<0.01]和空白对照组[(1.70±0.20)%, P<0.01];G1期细胞百分比[(44.74±6.76)%]较阴性对照组和空白对照组减少(均P<0.05), G2/M期细胞百分比[(41.88±2.88)%]较阴性对照组和空白对照组增多(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示, 共转染IRAK1 WT和miR-146a模拟物组的荧光素酶活性明显低于其他对照组(均P<0.01)。RT-qPCR和Western blot检测结果显示, miR-146a模拟物转染组细胞中IRAK1 mRNA的表达水平为1.02±0.28, 蛋白的表达水平为1.00±0.05, 均低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.01)。结论 miR-146a在食管鳞癌细胞株中表达降低, 扮演着抑癌基因的角色。miR-146a能抑制食管鳞癌细胞的增殖、侵袭和迁移, 促进其凋亡, 阻滞细胞周期于G2/M期。miR-146a可能通过IRAK1的介导调控食管癌细胞的恶性生物学行为。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院