配体活化多环芳烃受体与二恶英反应元件结合能力的测定

作者：孙晞; 徐顺清

来源：现代预防医学, 2005, 32(03): 189-191.

DOI：10.3969/j.issn.1003-8507.2005.03.001

• 离解常数
• 多环芳烃受体
• 二恶英反应元件

目的 :2 ,3,7,8-四氯化二苯并二恶英 (TCDD)激活细胞溶质中多环芳烃受体后形成的复合物可与含二恶英反应元件的DNA探针结合 ,本研究利用新建立的外切酶保护PCR方法测定此结合亲和力 ,为评估配体的生物或毒效应提供依据。方法 :将 2 0nmol/LTCDD溶液与 10 0 μlSD大鼠肝细胞溶质温育 ,再与 0～ 15nmol/L含二恶英反应元件的寡核苷酸探针作用形成复合物 ,用核酸外切酶Ⅲ和S1核酸酶进行消化后 ,利用SYBRGREEN荧光适明定量PCR测定其诱导产生的结合DNA含量 ,绘制饱和曲线。经过数学变换估算配体—AhR复合物与DNA结合反应的宏观解离常数 (Kd和最大受体结合量 (Bmax)。结果 :绘制出TCDD活化AhR结合DNA的饱和曲线 ,计算得 :宏观解离常数Kd值为 1. 7± 0 . 2 (nmol/L) 2 ,DNA探针的最大受体结合量为 (14 6 7± 12 3)fmol/mg蛋白。结论 :外切酶保护PCR分析可测定配体诱导产生的AhR -DNA结合活性 ,为二恶英作用强度提供信息。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 暨南大学