抗人肝癌基因工程嵌合抗体的构建及在Sp2/0细胞的稳定表达

作者：邢金良; 杨向民; 宋斐; 姚西英; 陈志南

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2004, (06): 64-67.

DOI：10.3760/j:issn:0254-5101.2004.06.021

• 肝癌
• 嵌合抗体
• 表达

目的　构建抗人肝癌嵌合抗体 ,并在Sp2 0细胞中进行稳定高效表达。方法　分别将HAb18轻、重链可变区基因克隆入真核表达载体pDHL构建重组载体pDHL chHAb18。酶切及测序鉴定后 ,转染Sp2 0细胞 ,经甲氨蝶蛉 (MTX)筛选获得抗性克隆。采用有限稀释法单克隆化后持续MTX加压培养。通过ELISA筛选高效表达的单克隆细胞株。表达产物纯化后 ,进行SDS PAGE和Westernblot检测 ,同时采用ELISA和免疫荧光法检测其抗原结合特异性。结果　成功构建了重组嵌合IgG抗体chHAb18的真核表达载体pDHL chHAb18。转化Sp2 0细胞后 ,初步筛选得到了高效表达chHAb18的细胞株。经MTX加压培养 ,1株细胞的chHAb18表达量达到 10mg L。SDS PAGE和Westernblot检测结果表明 :目的蛋白分子质量约为 16 0× 10 3,还原后为 2条带 ,分子质量约为 5 2× 10 3和 2 7× 10 3。上述蛋白条带均与羊抗人IgG抗体特异结合。结论　成功构建了抗人肝癌基因工程嵌合抗体chHAb18,并在骨髓瘤细胞中获得高效表达。为其进一步的应用研究奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学