微小RNA-129-5p通过成纤维细胞生长因子2调节老年性骨质疏松性骨折中骨分化和骨稳态的功能研究

作者：尚文韬; 贾智超; 周玉哲; 宋鹏; 肖鹏^*

来源：中华实验外科杂志, 2023, 40(11).

• 老年性骨质疏松性骨折
• 破骨细胞分化
• 微小RNA-129-5p
• 成纤维细胞生长因子2
• 核因子-κB受体活化因子配体

目的探讨破骨细胞分化过程中微小RNA(miR)-129-5p的失调以及miR-129-5p在破骨细胞分化中的确切作用机制。方法首先建立核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导鼠源单核巨噬细胞(RAW264.7)分化的破骨细胞, 实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-129-5p在破骨细胞分化前后的表达差异。然后用miR-129-5p模拟物处理RANKL诱导的RAW264.7细胞, 验证miR-129-5p对破骨细胞分化的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验用于检测破骨细胞的增殖活性, 抗酒石酸酸性磷酸酶染色确定破骨细胞数目, 蛋白质印迹法检测破骨相关标志物的蛋白表达。最后, 通过RT-qPCR或蛋白质印迹法分析miR-129-5p对成纤维细胞生长因子2(FGF2)表达的影响。组间统计学差异采用T-Test法检验。结果 miR-129-5p在RANKL组的表达水平低于对照组(0.405±0.007比0.984±0.031, t=24.070, P<0.01)。在功能上, 上调miR-129-5p可以抑制破骨细胞的分化, CCK-8实验结果显示, miR-129-5p处理组的破骨细胞活力低于阴性对照组(1.096±0.027比0.549±0.006, t=33.670, P<0.001)。机制上, miR-129-5p对破骨细胞分化的抑制作用, 可能与负调节FGF2表达有关。RT-qPCR实验结果显示, miR-129-5p处理组破骨细胞中FGF2 mRNA表达水平明显低于对照组(1.001±0.026比0.151±0.004, t=48.001, P<0.01)。此外, 功能挽救实验结果表明过表达FGF2可以抵消miR-129-5p上调对破骨细胞分化的抑制作用。RT-qPCR实验结果显示, miR-129-5p mimic+OE-FGF2组破骨细胞中FGF2的水平高于miR-129-5p mimic+OE-NC组(0.973±0.059比5.108±0.018, t=86.059, P<0.001), 差异均有统计学意义。结论 miR-129-5p通过负调节FGF2表达, 显著抑制了破骨细胞分化。

• 单位
  郑州大学第一附属医院