柱前衍生—超高效液相色谱法测定母乳中16种氨基酸的含量

作者：李娜; 田芳; 曲栗; 钱昌丽; 高琴; 韩丽; 赵艳荣; 王玉^*

来源：理化检验. B, 化学分册, 2022, 58(11): 1328-1334.

• 柱前衍生
• 超高效液相色谱法
• 氨基酸
• 母乳
• 方法比对

以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)进行柱前衍生，以超高效液相色谱法测定了人初乳、过渡乳、成熟乳中的苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、酪氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸和牛磺酸等16种氨基酸的含量，并与GB 5009.124-2016中氨基酸分析法(GB法)的测定结果进行对比。取解冻后的母乳0.22 mL,加入水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、L-正缬氨酸内标溶液和含0.1%(体积分数)苯酚的盐酸溶液，氮吹5 s,涡旋混匀后，于110℃水解(24±0.5) h。从液面下1 cm处取0.2 mL水解样品，加入氢氧化钠溶液和盐酸溶液，涡旋后过0.2μm尼龙滤膜。取上述滤液10μL,用AQC衍生试剂衍生，于55℃加热10 min,按照优化的仪器工作条件测定。在ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱上进行梯度洗脱分离，在检测波长260 nm处检测，内标法定量。结果显示，16种氨基酸标准曲线的线性范围为0.5～25μmol·L-1,检出限(3s)为2.5～10.7 mg·L-1。对实际样品进行3个浓度水平的加标回收试验，回收率为95.0%～108%,测定值的相对标准偏差(n=6)均不大于9.0%。方法用于不同泌乳阶段母乳的分析，除了过渡乳和成熟乳中的组氨酸外，所得其他母乳中的氨基酸的测定值均显著高于GB法的(P<0.05),推测与前处理方法、仪器、取样量等的差异有关，具体原因还待进一步研究。

• 单位
  兰州大学; 公共卫生学院