RNA干扰沉默黏蛋白1基因表达对食管癌细胞株Eca109顺铂耐药性的影响

作者：王衍泽; 管向臣; 史墨; 辛钟伟; 刘相燕

来源：中华实验外科杂志, 2017, 34(09): 1476-1478.

• 食管鳞状细胞癌
• 黏蛋白1
• 顺铂耐药性
• RNA干扰

目的观察RNA干扰沉默黏蛋白1(MUC1)表达,食管癌细胞株Eca109在顺铂作用下的增殖差异,探讨MUC1表达与肿瘤顺铂耐药性的关系。方法设计靶向MUC1基因的慢病毒载体pGC-LV-MUC1小干扰RNA(siRNA),并以感染复数(MOI)=100转染人食管癌细胞株Eca109,用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(GFP)表达,用Western blot方法检测细胞内MUC1蛋白含量,验证siRNA对MUC1基因抑制作用。设置浓度梯度0、5、15、30、45、60μmol/L,分别作用0、12、24、48 h,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞抑制率,计算顺铂半数抑制浓度(IC50)。用Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)的表达,验证凋亡通路激活。结果与对照组比较,转染了重组慢病毒颗粒pGC-LV-MUC1 siRNA的Eca109细胞(实验组)内MUC1蛋白水平(0.566±0.202比1.252±0.323,t=3.119,P=0.036);顺铂作用12 h实验组IC50(μmol/L)(66.860±4.749比30.203±0.341,t=13.335,P=0.000)明显下降;顺铂作用24 h实验组细胞IC50(μmol/L)明显下降(13.710±0.617比33.680±1.737,t=18.759,P=0.000);实验组凋亡相关蛋白bcl-2表达减少(0.551±0.190比1.416±0.139,t=6.362,P=0.003),bax的表达增加(0.553±0.055比1.345:±0.155,t=8.335,P=0.001)。结论人食管癌细胞株Eca109沉默MUC1基因表达,可以导致细胞对顺铂耐药性下降。MUC1基因可能通过抑制凋亡激活途径,增加食管癌细胞对顺铂的耐药。

• 单位
  平邑县人民医院; 山东大学