1种检测新城疫病毒的微滴式数字PCR方法

作者：梅力; 王英超; 吴迪; 李月; 宋彦军; 韦海涛; 王林; 高晓龙^*; 冯小宇^*

来源：畜牧兽医学报, 2020, 51(12): 3187-3192.

• 新城疫病毒
• 数字PCR
• 检测方法

本研究旨在构建一种新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)的微滴式数字PCR方法(droplet digital PCR,ddPCR)。以NDV F基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,构建了NDV ddPCR。对ddPCR反应引物和探针浓度、退火温度进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行测定。试验结果表明,ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900和250 nmol·L-1,最佳的退火温度为55℃。ddPCR的线性良好,最低检测下限为1.8 copies·μL-1,与禽传染性支气管炎病毒等其他6种病毒无交叉反应,样本重复的变异系数为2.4%。结果提示,本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强,可对新城疫病毒感染的临床样品进行定量检测。