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摘要
目的探讨灵芝三萜联合外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialotetrahexosyl ganglioside, GM1)对戊四氮(pentylenetetrazol, PTZ)致痫大鼠认知功能及海马神经元突触超微结构的影响。方法将40只雄性清洁级SD大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、癫痫模型组、灵芝三萜组、GM1组、灵芝三萜联合GM1组, 每组8只。采用腹腔注射亚惊厥剂量PTZ( 35 mg·kg-1·d-1)的方法建立慢性癫痫大鼠模型, 1次/d, 连续28 d;用药各组大鼠在每日腹腔注射PTZ的同时按分组给予相应药物( GM1:腹腔注射30 mg·kg-1·d-1, 灵芝三萜:灌胃1 000 mg·kg-1·d-1)。应用Morris水迷宫观测各组大鼠学习记忆能力;透射电镜观察海马神经元突触超微结构;免疫荧光染色法观察大鼠海马CA1区丝切蛋白(cofilin)、突触素(synaptophysin, SYN)的表达, 同时用Western blot检测大鼠海马cofilin及其磷酸化p-cofilin和SYN的蛋白表达。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析, 组间多样本采用单因素方差分析(one-way ANOVA), 两两比较采用LSD检验。结果 Morris水迷宫结果显示, 各组间的逃避潜伏期、穿越平台次数、目标象限停留时间均差异有统计学意义(F=5.259, 8.240, 5.961, 均P<0.05)。与癫痫模型组相比, 灵芝三萜组、GM1组和灵芝三萜联合GM1组大鼠的逃避潜伏期[(20.31±7.39)s, (21.81±6.05)s, (17.66±4.76)s]均短(均P<0.05), 穿越平台次数[(4.63±1.41)次, (4.50±1.93)次, (5.50±1.77)次]均多(均P<0.05), 目标象限停留时间[(31.91±5.00)s, (30.49±5.72)s, (35.70±5.34)s]均长(均P<0.05), 以灵芝三萜联合GM1组变化最明显(P<0.01)。透射电镜结果显示, 各组海马神经元突触数量、突触间隙宽度、突触后致密物厚度、突触后膜活性区长度均差异有统计学意义(F=3.693, 7.201, 5.012, 4.033, 均P<0.05)。与癫痫模型组比较, 灵芝三萜组、GM1组和灵芝三萜联合GM1组神经元突触数量[(8.00±1.79)个, (7.83±1.84)个, (8.50±1.87)个, ]均多(均P<0.05), 突触间隙[(33.83±3.81)nm, (32.43±4.14)nm, (30.23±3.08)nm]窄, 突触后致密物质[(57.50±6.03)nm, (58.10±2.40)nm, (60.73±3.81)nm]均厚(均P<0.05)。灵芝三萜组和灵芝三萜联合GM1组突触后膜活性区长度[(271.66±11.80)nm, (279.06±13.58)nm]均长于癫痫模型组(均P<0.05)。免疫荧光结果显示, 癫痫模型组cofilin平均荧光强度高于空白对照组, SYN平均荧光强度低于空白对照组(P<0.05);GM1组和灵芝三萜联合GM1组cofilin平均荧光强度均低于癫痫模型组(均P<0.05), 灵芝三萜联合GM1组SYN平均荧光强度高于癫痫模型组(P<0.05)。Western blot检测发现, 癫痫模型组cofilin蛋白表达量高于空白对照组[(1.454±0.080), (1.092±0.099), P<0.05], p-cofilin、SYN的表达量均低于空白对照组[(1.103±0.120), (1.420±0.934);(1.650±0.062), (1.958±0.062);均P<0.05];灵芝三萜组、GM1组和灵芝三萜联合GM1组大鼠海马组织内cofilin蛋白表达[(1.227±0.071), (1.262±0.078), (1.162±0.129), P<0.05]均低于癫痫模型组, 灵芝三萜联合GM1组p-cofilin、SYN蛋白表达[(1.357±0.199), (1.873±0.010), P<0.05]均高于癫痫模型组。与灵芝三萜组、GM1组比较, 灵芝三萜联合GM1组各指标均差异无统计学意义(均P>0.05)。结论灵芝三萜联合GM1可改善神经元突触可塑性, 提高癫痫大鼠学习记忆能力, 部分指标优于单独用药。
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单位右江民族医学院附属医院; 基础医学院; 右江民族医学院
