缺糖缺氧/再灌注对星形胶质细胞外泌体miRNAs表达的影响

作者：韩韦华; 黄庭睿; 文田甜; 沈耀

来源：国际检验医学杂志, 2023, 44(04): 430-435.

• 星形胶质细胞
• 外泌体
• miRNAs
• 缺糖缺氧/再灌注

目的 探讨缺糖缺氧/再灌注(OGD/R)对星形胶质细胞外泌体中微小RNA(miRNAs)表达的影响。方法 对新生原代培养的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞进行缺糖缺氧(OGD)或OGD/R处理，采用超高速离心法分别收集培养基上清液和细胞内的外泌体。通过透射电镜和流式细胞术鉴定外泌体。采用Illumina Hiseq2500测序平台检测外泌体miRNAs的表达谱，从中选取表达受OGD及OGD/R处理影响的miRNAs。并用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)对生物信息学分析中差异有统计学意义的miRNAs进行实验验证。使用metascape和miRWalk预测高表达miRNAs的靶基因，再将挑选出的共同靶基因在Webgestalt中进行KEGG富集分析。采用Western blot(WB)检测OGD/R及其星形胶质细胞外泌体对全反式维甲酸(ATRA)诱导分化的SH-SY5Y细胞Erk磷酸化水平的影响。结果 与对照组相比，OGD 4 h处理改变了星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达谱；而再灌注24 h后改变的miRNAs大部分恢复到对照组水平。qPCR验证显示：3种miRNAs在外泌体中的分布水平远高于细胞，而且这种富集作用可能不受OGD刺激的影响。KEGG富集分析显示：表达上调miRNAs的靶基因信号通路主要为代谢通路，包括PI3K-AKT、MAPK和mTOR信号通路等。OGD、OGD/R及正常星形胶质细胞外泌体处理均能上调相应培养条件下SH-SY5Y细胞的p-Erk1和p-Erk2水平。结论 OGD处理能显著影响星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达，其外泌体中富集分布的miRNAs均靶向作用于代谢通路，如PI3K-AKT、MAPK和mTOR等信号通路。

• 单位
  温州医科大学; 生命科学学院