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摘要
物种特异的酸性核磷蛋白32A（Acidic Nuclear Phosphoprotein 32A， ANP32A）调节不同宿主A型流感病毒RNA聚合酶活性。为分析犬ANP32A（canine ANP32A， caANP32A）的物种特异性及其在流感病毒跨物种感染中的作用，利用RT-PCR方法从MDCK细胞以及犬肺、脾、肠不同组织中扩增和克隆caANP32A；激光共聚焦实验分析caANP32A与A型流感病毒RNA聚合酶的相互作用；双荧光素酶报告基因实验检测过表达caANP32A对A型流感病毒RNA聚合酶活性的影响。结果显示，从MDCK细胞中扩增到新的caANP32A，比已报道的caANP32A多出4个氨基酸插入，从犬肺、脾和肠组织中均扩增到该新的caANP32A；对caANP32A的基因进行测序分析，发现该新的caANP32A不是由mRNA选择性剪接形成的；激光共聚焦实验发现，新caANP32A与H3N2 CIV的RNA聚合酶在细胞核中共定位；聚合酶活性试验显示，在哺乳动物细胞过表达新caANP32A不能促进H9N2禽流感病毒（avian influenza virus，AIV）和H3N2犬流感病毒（canine influenza virus， CIV）的RNA聚合酶活性，而鸡ANP32A（chANP32A）能够促进。本研究克隆的新caANP32A较以往报道，在176至179位存在四个氨基酸LSLV的插入，但新caANP32A对AIV的RNA聚合酶活性仍然有物种限制性且该新的caANP32A也未增强CIV的RNA聚合酶活性。本研究为进一步解析犬在流感病毒跨物种感染中的作用提供依据。
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