摘要
目的 探究啶虫脒(Acetamiprid, ACE)对睾丸间质细胞TM3的毒性作用,为ACE致生殖毒性机制研究提供理论基础。方法 应用DMEM-F12培养基培养TM3细胞。以不同浓度ACE处理TM3细胞24 h和48 h,采用CCK8法测定细胞活力,计算24 h IC50。根据IC50值选择后续TM3细胞暴露的适宜ACE浓度。ACE处理TM3细胞24 h,流式细胞术测定细胞凋亡率,qPCR测定细胞增殖指数PCNA、Ki67 mRNA,及睾酮合成酶基因Star、Hsd3b1、Cyp11a1 mRNA的表达。结果 细胞活力在4、6、8、10、12 mmol/L随ACE浓度升高而下降,且在8、10、12 mmol/L组,48 h细胞活力显著低于24 h(P<0.05)。计算24 h IC50为7.20 mmol/L,故后续以0、2、4、6、8 mmol/L ACE处理TM3细胞24 h。与0 mmol/L组相比,PCNA mRNA在6、8 mmol/L组表达显著降低(P<0.01),Ki67 mRNA在4、6、8 mmol/L组表达显著降低(P<0.05)。流式细胞术结果发现,TM3细胞凋亡率随ACE浓度升高而增加。ACE处理还可以导致Star和Hsd3b1 mRNA在6、8 mmol/L表达显著升高(P<0.05),Cyp11a1 mRNA在所有剂量组均显著升高(P<0.01)。结论 ACE暴露可通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡导致细胞活力降低,同时,ACE可通过上调Star、Hsd3b1、Cyp11a1基因表达影响睾酮合成过程,但相关机制还需要进一步研究。
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单位沈阳医学院; 公共卫生学院