布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂联合硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞的作用及其机制

作者：张雯; 程辉; 唐古生; 丁静; 胡晓霞; 杨建民; 王健民; 吕书晴

来源：第二军医大学学报, 2016, 37(11): 1325-1332.

DOI：10.16781/j.0258-879x.2016.11.1325

• 多发性骨髓瘤
• 布鲁顿酪氨酸激酶
• 依鲁替尼
• AVL-292
• 硼替佐米
• 药物协同作用

目的探讨布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,BTK)抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)和AVL-292单药及联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞系H929和RPMI8226的作用及其机制。方法用不同浓度的依鲁替尼、AVL-292单药以及联合硼替佐米处理H929、RPMI8226细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测药物处理前后细胞内BTK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果依鲁替尼和AVL-292均可抑制H929、RPMI8226细胞增殖,其抑制作用呈浓度依赖性,依鲁替尼对H929、RPMI8226细胞48h的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC50)分别为(10.41±3.29)μmol/L和(51.65±13.58)μmol/L,AVL-292对H929、RPMI8226细胞48h的IC50分别为(7.77±2.99)μmol/L和(6.44±1.06)μmol/L。不同浓度的依鲁替尼(5、10μmol/L)和AVL-292(5、10μmol/L)分别与不同浓度的硼替佐米(5、10、20、50nmol/L)联合应用对H929、RPMI8226细胞增殖的抑制率均高于相应浓度单药组(P<0.05,P<0.01),不同组合的协同系数R均>1.0。10μmol/L依鲁替尼、10μmol/L AVL-292和20nmol/L硼替佐米单独作用48h后,H929细胞的凋亡率分别为(15.12±1.59)%、(18.23±6.38)%和(10.71±1.62)%,均高于对照组[(6.46±1.18)%;P<0.05,P<0.01];RPMI8226细胞的凋亡率分别为(9.29±1.44)%、(15.01±4.99)%和(7.58±1.13)%,10μmol/L依鲁替尼和10μmol/L AVL-292单药组与对照组[(5.54±1.61)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05);10μmol/L依鲁替尼和10μmol/L AVL-292分别与20nmol/L硼替佐米联合后,H929细胞凋亡率分别为(40.31±3.94)%和(51.55±6.39)%,RPMI8226细胞凋亡率分别为(31.86±1.93)%和(43.23±4.03)%,均高于相应单药组(P<0.01)。10μmol/L依鲁替尼单药和10μmol/L AVL-292单药作用24h后,H929细胞内BTK、NF-κB p65、Akt和ERK的磷酸化水平及Bcl-xL蛋白表达水平均较对照组降低(P<0.05),cleaved caspase-3表达水平均较对照组升高(P<0.01);两药分别联合20nmol/L硼替佐米后,对上述蛋白的调节作用均较相应单药组增强(P<0.05,P<0.01)。结论 BTK抑制剂依鲁替尼和AVL-292对多发性骨髓瘤细胞系H929、RPMI8226有增殖抑制和凋亡诱导作用,并与蛋白酶体抑制剂硼替佐米有协同作用,其机制可能与抑制细胞内BTK活性及下游NF-κB、Akt、ERK信号通路活性,下调抗凋亡蛋白Bcl-xL表达、激活caspase-3依赖的凋亡途径有关。

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学; 长海医院