人SPK1基因的重组腺病毒载体感染效率及表达特性研究

作者：杨阳; 马嵘; 张远; 刘郁东; 汪敏; 孙圣刚; 黎钢

来源：中国实验诊断学, 2015, 16(11): 1969-1972.

• 重组复制缺陷型腺病毒
• 小鼠神经瘤细胞
• 感染效率
• 鞘氨醇激酶-1

目的研究重组腺病毒载体感染小鼠神经瘤细胞(N2a)的感染效率及重组腺病毒介导的人鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1,SPK1)基因在N2a细胞表达特性。方法用流式细胞仪检测感染效率,用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;用Western blot方法检测SPK1蛋白的表达。结果 N2a细胞的感染效率和绿色荧光蛋白表达量在一定范围内随着病毒感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的增加而增高,MOI为100时感染效率达峰值为(99.57±0.133)%。以MOI为25的重组腺病毒感染N2a细胞,感染效率随时间变化(0-72h)而增高,72h峰值为(98.03±0.721)%,到96h有所降低(P<0.05)。SPK1蛋白的表达量较感染空病毒组和未感染病毒组明显升高。结论重组腺病毒在适宜的MOI下,在N2a细胞中96小时内均有较高的感染效率,且重组腺病毒介导的人SPK1基因在体外能够得到有效的表达。

• 单位
  神经内科; 华中科技大学同济医学院附属协和医院